全血基因組提取試劑盒

 

 

本試劑盒通過裂解紅細(xì)胞、裂解白細(xì)胞及細(xì)胞核、沉淀蛋白、分離基因組等過程從全血中提取基因組。試劑盒特點(diǎn)：提取的基因組DNA長(zhǎng)度大于20kb, 可用于PCR擴(kuò)增、內(nèi)切酶消化以及膜雜交等；每100ul全血樣品預(yù)期提取量1-5ug；所提基因組DNA效果好；提取過程不超過45分鐘；可室溫保存1年。與全血基因組提取試劑盒（I）不同的是裂解紅細(xì)胞及有核白細(xì)胞同時(shí)進(jìn)行，省去了多個(gè)步驟，復(fù)合裂解液中含有抑制DNA酶的成分，在加熱（65°C）狀態(tài)下，可保證完整的基因組DNA的充分裂解釋放，異丙醇沉淀時(shí)，罕見渾濁的蛋白質(zhì)雜質(zhì)共沉淀。本試劑盒提供100次100ul全血樣本基因組提取的足量試劑。 本試劑盒也可用于培養(yǎng)細(xì)胞，組織基因組以及培養(yǎng)細(xì)菌或真菌基因組DNA的提取。

 

1、細(xì)胞復(fù)合裂解液：35ml                            2、蛋白沉淀液： 25ml×1瓶

3、DNA溶解液： 5ml瓶                                4、說(shuō)明書： 1份

本試劑盒沒有提供，但*的試劑包括：異丙醇（國(guó)產(chǎn)分析醇）；70%乙醇。

樣品

1、 樣品要求：用于DNA提取的全血應(yīng)為抗凝血（EDTA, 肝素或檸檬酸鈉抗凝），抗凝血在4°C存放5天以內(nèi)（存放時(shí)間長(zhǎng)，DNA產(chǎn)量低），-20°C存放一個(gè)月以內(nèi), -80°C至少可存放2年均能純化出高質(zhì)量的DNA（凍存血較新鮮血產(chǎn)量低）。

2、 全血需求量：本試劑盒可一次提取少至20-300ul,多至10ml的全血DNA,標(biāo)準(zhǔn)提取量為100ul。

 

注：血液及組織標(biāo)本應(yīng)視為傳染性材料處理。

操作程序（以100ul全血為例）

1、 細(xì)胞復(fù)合裂解液置65°C水浴中使其中的結(jié)晶溶解。

2、 吸取100ul混勻的全血至1.5ml離心管中，加入結(jié)晶成分已溶解的細(xì)胞復(fù)合裂解液300ul，混璇器震蕩混勻20秒，置65°C水浴中反應(yīng)20分鐘。

3、 加入200ul蛋白沉淀液，上下顛倒5-6次使兩者混勻。

4、 13000-16000×g，離心3-5分鐘。

 

5、 將上清液（約500ul）轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入等體積異丙醇，此時(shí)可見透明的絮狀物，混勻后離心，同步驟4，傾去上清。

6、 加入200ul 70%的乙醇溶液（基因組DNA在70%乙醇中，存于-80　C，可長(zhǎng)期保存），來(lái)回倒置，清洗管壁，離心，同步驟4。

7、 移去70%乙醇，倒置離心管于干凈的濾紙上，自然干燥10-15分鐘，加入33ul DNA溶解液。快速漩渦震蕩1-2秒，使DNA溶解液沖刷到所有沉淀的DNA。

8、 65　C水浴1小時(shí)，或4　C過夜使DNA充分溶解（要求不嚴(yán)格的PCR試驗(yàn)可縮短時(shí)間或省去該步），輕輕彈動(dòng)管壁有助于溶解。

 

 

 

全血量	復(fù)合裂解液量	蛋白沉淀液量	異丙醇量	70%乙醇量	DNA溶解液量
100 ul	300 ul	200 ul	500 ul	200 ul	33 ul
300ul	3x300 ul	3x 200 ul	3x500ul	3x200ul	3x33 ul