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細(xì)胞支原體污染PCR檢測試劑盒
更新時間：2014-07-08
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細(xì)胞支原體污染PCR檢測試劑盒
產(chǎn)地:美國Southern Biotech Associates,Inc. （SBA）
產(chǎn)品信息：
中文名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
支原體PCR檢測試劑盒 | Mycoplasma Detection Kit | 13100-01 | 50T |
產(chǎn)品特點(diǎn)：
- 用于特異性檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中支原體的污染
- 用于擴(kuò)增支原體基因組中16S rRNA編碼區(qū)
- 特殊的引物設(shè)計(jì)擴(kuò)增用于覆蓋支原體的三大類（Mycoplasma,Acholeplasma and Ureaplasma）,因此可檢測超過95%的潛在的細(xì)胞污染。
- 檢測方法簡單，3小時內(nèi)出結(jié)果。
- 檢測靈敏度高：可檢測到100ul細(xì)胞上清液中2-5毫微微克的支原體DNA。
- 特異性高，只擴(kuò)增細(xì)胞培養(yǎng)液中支原體DNA，而真核細(xì)胞和細(xì)菌的DNA被擴(kuò)增。
- 試劑盒帶有陽性對照用于驗(yàn)證PCR體系的穩(wěn)定性。
- 試劑盒內(nèi)帶有內(nèi)參對照，用于排除PCR抑制劑引起的假陰性。
試劑盒用于擴(kuò)增的支原體種屬及對應(yīng)PCR產(chǎn)物對照片段
支原體種屬 | PCR產(chǎn)物片段(bp) |
A.laidlawii | 611 |
M.arginini | 448 |
M.arthritidis | 486 |
M.bovis | 605 |
M.cloacale | 459 |
M.falconis | 458 |
M.faucium | 479 |
M.fermentans | 579 |
M.genitalium | 464 |
M.hominis | 448 |
M.hyorhinis | 525 |
M.hyosynoviae | 471 |
M.opalescents | 573 |
M.orale | 503 |
M.pirum | 533 |
M.pneumonia | 493 |
M.salivarium | 482 |
M.synoviae | 572 |
U.urealyticum | 558 |
結(jié)果分析：
- 細(xì)胞如被支原體污染，可擴(kuò)增到448-611bp一條或多個條帶
- 樣本中包含內(nèi)參的DNA將會擴(kuò)增出270bp的PCR片段（見圖，泳道7），該擴(kuò)增表明實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)可靠性。
- 如在一些樣品中擴(kuò)增不到內(nèi)參(270bp)，這種情況下可設(shè)置陰性對照（樣本為水），可擴(kuò)增到270bp的條帶。
- 如果樣品中含有PCR的抑制劑，可通過DNA提取去除。
- 如果細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的支原體污染，448-611bp擴(kuò)增產(chǎn)物將聚集或270bp的內(nèi)參將消除（見圖，泳道6）
- 低于100bp的低濃度片段，表明是二聚體或非特異性片段，而非陽性結(jié)果，這種情況不影響檢測結(jié)果的精度。
檢測結(jié)果示例：
Lane1:大腸桿菌基因組擴(kuò)增結(jié)果 Lane2:雜交瘤細(xì)胞DNA擴(kuò)增結(jié)果
Lane3:陰性對照（水） Lane4:陽性對照
Lane5:抑制劑樣本 Lane6:嚴(yán)重支原體污染的細(xì)胞
Lane7:輕度支原體污染的細(xì)胞 Lane8:100bp DNA ladder
